人白細胞介素-4基因在家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達

采用RT-PCR法從經(jīng)LPS誘導刺激的人外周血淋巴細胞中克隆了人白細胞介素-4 (human interleukin-4, hIL-4) 基因.為高效表達hIL-4,促進其臨床應用,將hIL-4插入家蠶桿狀病毒轉移載體pBacPAK8中,構建重組載體pBacPAK-hIL-4,并與線性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共轉染家蠶BmN細胞,獲得重組病毒BacPAK-hIL-4.將重組病毒感染家蠶5齡幼蟲和蠶蛹 (1×105 PFU/頭),表達產物以ELISA 、SDS-PAGE和Western blotting方法檢測,用活化的人外周血T淋巴細胞測定表達產物體外生物活性.ELISA法結果表明hIL-4在感染病毒后96 h 的蠶血淋巴和120 h 的蠶蛹中表達量最高,分別達到2.3 μg/ mL蠶血淋巴和10.2 μg/ mL體液;SDS-PAGE、Western blotting分析表明表達產物分子量約20 kD;表達產物對活化的T淋巴細胞增殖具有明顯促進作用.

作 者： 陳蔚青 史鋒 朱成鋼 申屠超 CHEN Wei-Qing SHI Feng ZHU Cheng-Gang SHEN Tu-Chao   作者單位： 陳蔚青,申屠超,CHEN Wei-Qing,SHEN Tu-Chao(浙江樹人大學生物與環(huán)境工程學院,杭州,310015)

史鋒,朱成鋼,SHI Feng,ZHU Cheng-Gang(浙江大學生物化學研究所,杭州,310029) 

刊 名： 蠶業(yè)科學  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA SERICOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 32(4)  分類號： Q78 S881.2  關鍵詞： 人白細胞介素-4基因   克隆   表達   家蠶桿狀病毒表達載體系統(tǒng)  

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